高危型HPVE6/E7mRNA检测在宫颈病变筛查过程中的临床应用价值

Clinical Value of High-Risk HPVE6/E7mRNA Test in Screening for Cervical Lesions

摘要: 宫颈癌是女性生殖系统常见的妇科肿瘤之一，近年发病率呈逐渐上升，严重威胁女性健康。高危型人乳头瘤病毒(HPV)持续性感染与宫颈癌的发生密切相关，但自HPV感染发展为宫颈癌需要多年，因此宫颈癌早期筛查尤为重要。近年来HR-HPVE6/E7mRNA检测是一种新开发的宫颈癌筛查工具，其检测程序主要包括靶标俘获、转录介导型扩增、杂交保护测定(HPA)检测扩增产物，能够检测HPV感染并同时预测宫颈病变的变化，目前全球部分地区已经使用，为无创操作，有良好的安全性。HPVE6/E7mRNA检测对宫颈癌筛查、提高女性生活质量具有重要意义，随着HPVE6/E7mRNA检测的推广及应用，将有更多女性远离宫颈癌困扰。

Abstract: Cervical cancer is one of the common gynecological tumors in the female reproductive system. In recent years, the incidence has gradually increased, posing a serious threat to women’s health. Per-sistent infection of high-risk human papillomavirus (HPV) is closely related to the occurrence of cervical cancer, but it takes many years for HPV infection to develop into cervical cancer, so early screening of cervical cancer is particularly important. In recent years, HR-HPVE6/E7mRNA detec-tion is a newly developed cervical cancer screening tool, its detection program mainly includes tar-get capture, transcription-mediated amplification, hybridization protection determination (HPA) detection amplification products, can detect HPV infection and predict the change of cervical lesions at the same time, some parts of the world have been used, for non-invasive operation, have good safety. HPVE6/E7mRNA testing is of great significance for cervical cancer screening and the im-provement of women’s quality of life. With the promotion and application of HPVE6/E7mRNA test-ing, more women will stay away from cervical cancer problems.

1. 引言

对于妇女全球癌症分布的研究和分析中发现，目前宫颈癌(cervical cancer, CC)位居女性因癌症死亡的第4位，是最为普遍和威胁着妇女健康及其生命安全的恶性肿瘤之一 [1] [2] [3] 。尽管宫颈癌在目前是所有已知的癌症中可以预防的恶性肿瘤之一，但新的宫颈癌患者的病例总量仍在持续增加，且其患病率也日益年轻化 [4] [5] 。根据孟令昊等人研究显示，自1990年的4.07万人增长至2019年10.98万人，期间30年，中国宫颈癌发病人数增长了169.78%，粗发病率较30年前增长122.00% [6] 。宫颈癌的发生主要取决于人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV)对宫颈的持续性感染，其进展为宫颈癌需要持续多年甚至数十年不等。HPV的某些高危型致癌菌株与宫颈癌之间的关联已得到很好的确立。多项研究发现，在宫颈病变、宫颈癌的早期发生和其它的进展中，HR-HPV的不断反复感染发挥着重要作用 [7] ；研究表明，HPVE6/E7mRNA检测可以提高对宫颈高级别上皮内病变的诊断效能 [8] 。本文就高危型HPV E6/E7mRNA检测在宫颈病变中的价值研究作一综述。

2. HPV

人乳头瘤病毒(HPV)，呈椭球形，无包膜，直径约为45~55 nm，基因长约8.0 kb，大约含有8000个碱基对，分为3个不同的区域，包括早期基因编码区域(E区)、晚期基因编码区域(L区)和调控区域(LCR区)。其中E基因区包括E1、E2、E4~E7共6个功能蛋白，主要发挥调控功能 [9] 。具体负责编码病毒复制过程中满足自身需要的一些蛋白及对人体有害的致癌蛋白；其中E6和E7，它们促进细胞增殖、延长细胞周期进程、防止细胞凋亡，允许病毒行多次复制，一个细胞内可以产生数百甚至数千个HPV基因组 [10] 。E1与E2连接后可以通过控制宿主细胞DNA复制机制和诱导HPVDNA病毒转录来控制病毒复制。且E2蛋白可以通过与E6、E7启动子附近的识别位点结合，有效地阻断病毒癌基因的转录。在转化过程中，致癌性HPV可以逃避这种负调控。即在超过80%的宫颈癌中，HPVDNA整合到宿主染色体中，通常会导致病毒E2基因的破坏，从而由于逃避E2介导的转录抑制而导致E6、E7表达增加 [11] 。其中，E6基因序列长约18 kD，编码150多个氨基酸，同时E6蛋白具有锌指结构，其功能与宫颈上皮细胞的癌基因的过度表达、恶性变存在密切的关系。而E7基因能够编码具有100个氨基酸左右的蛋白，主要作用使得HPV向细胞外转运 [12] 。E6和E7是最后通过刺激细胞生长、抑制细胞分化和诱导染色体不稳定性而被激活的基因。HPV的E6和E7DNA整合可形成新的肿瘤，肿瘤会增殖并侵入新组织 [13] 。相关研究也显示，E6及E7编码的致癌蛋白可与多种因子相互作用，参与宫颈癌的发生发展 [14] 。

3. HPV与宫颈癌的关系

宫颈癌是指发生于宫颈鳞–柱状上皮移行带的女性恶性肿瘤。2018年WHO统计结果显示：宫颈癌是全球女性第4大癌症，发生率为13.1/10万，死亡病例约31.1万例 [15] 。大约95%~99%的宫颈癌病例与高危(HR)-HPV的生殖器感染有关 [16] 。HPV主要感染皮肤和黏膜组织的上皮细胞，与生殖器疣变、子宫颈鳞状上皮内病变(Cervical squamous intraepithelial lesion, SIL)和宫颈癌(CC)发生密切相关，大多数女性在性生活后不久就会经历这种感染活跃期 [17] 。HR-HPV的持续感染是宫颈癌及其前驱病变的主要原因 [18] 。除了宫颈癌，HR-HPV还与很大一部分其他类型的癌症(肛门、外阴、阴道和阴茎)以及越来越多的头颈部肿瘤有关 [19] 。目前，已经对超过150种不同的HPV进行了表征和完全测序。其中约有40种通过性传播并感染生殖器 [20] 。HPV 16型和18型在全球所有宫颈癌病例中占比 > 70% [21] 。

4. 宫颈癌的筛查

目前我国针对宫颈癌遵循“三阶梯”诊断程序进行临床诊断，即宫颈细胞病理学检查和HR-HPV检测、阴道镜检查及组织病理学检查 [22] ，细胞病理学检查阳性合并HR-HPV DNA阳性患者转诊阴道镜检查及组织病理学诊断。因此，提高“三阶梯”筛查模式中第一阶段的灵敏度和特异度对提升整个宫颈癌早期筛查质量至关重要。HPVDNA检测虽能检测出是否有高危型HPV (HR-HPV)感染，但不能区分是短暂感染还是持续性感染。获得具有合理诊断性能的工具仍然是全球抗击宫颈癌的挑战。鉴于现有方法的不足，加上细胞学和HPVDNA检测的使用限制(包括但不限于敏感性/特异性问题以及无法表明进展为癌症的风险)，长期以来人们一直致力于开发新的宫颈癌筛查工具 [23] 。目前正在进行许多发现HPV相关宫颈癌筛查生物标志物的发现方法，其中HR-HPV E6/E7mRNA检测是一种很有前途的非侵入性生物标志物，能够检测HPV感染并同时预测宫颈病变的变化 [8] [24] 。

有研究报道，HPV-E6/E7mRNA和HPV-DNA检测在77.6%~92.5%检测宫颈病变方面的一致性。与基于DNA的检测相比，这仅表明病毒的存在或不存在，检测HPVE6/E7mRNA可以更深入地了解病毒活性，并暗示其临床相关性(与病变的严重程度相关性更好)。既往研究表明，对HPV-E6/E7mRNA的定性分析可用于宫颈肿瘤的鉴别诊断，以区分宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neopla-sia, CIN)与宫颈癌 [25] 。因此，后者是识别有发展为宫颈癌风险的妇女的一个潜在标志 [26] 。在这些初步发现的支持下，本研究是一项HR-HPVE6E7mRNA检测技术对宫颈病变筛查的纵向研究，以更好地评估RNA检测作为临床结果预测因素的作用。

5. 结语与展望

宫颈癌作为一种可通过早筛查、早发现、早干预得到有效防控的妇科恶性肿瘤，其筛查方法的选择虽尚未得到统一定论，但HPV检测一直作为筛查方法中有前途的一种。国际中一直认可的便是HPV DNA检测，但其存在特异性低和阳性预测值高的缺陷。HR-HPV E6/E7mRNA检测方法的应用，能够获得优越的灵敏度和更高的特异性，可显著减少诊疗过程中HPV短暂性感染造成的假阳性结果，帮助临床医生对病情进展进行更加准确的判别，在减轻患者的精神压力和经济负担的同时，对宫颈病变演变趋势的预判具有重要的预警作用。

NOTES

^*通讯作者。