BRAF V600E、p53、CD56、CK19、Galectin-3、TPO在247例甲状腺乳头状癌的表达与诊断价值

Expression of BRAF V600E, p53, CD56, CK19, Galectin-3, TPO in 247 Cases of Papillary Thyroid Carcinoma and Its Diagnostic Value

摘要: 目的：探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)的BRAF V600E、p53、CD56、CK19、Galectin-3、TPO的表达及诊断价值。方法：选取2019年12月至2021年12月在我院行手术治疗的PTC患者共247例为研究对象，收集其BRAF V600E、p53、CD56、CK19、Galectin-3、TPO表达情况，做出对比分析。结果：在247例PTC中，BRAF V600E、p53异常突变、CD56、CK19、Galectin-3、TPO的阳性率分别为95.95%、47.37%、22.27%、98.38%、99.19%、28.74%。结论：BRAF V600E、p53、CD56、CK19、Galectin-3、TPO检测对甲状腺乳头状癌的诊断意义重大。

Abstract: Objective: To investigate the expression and diagnostic value of BRAF V600E, p53, CD56, CK19, Ga-lectin-3 and TPO in papillary thyroid carcinoma. Methods: A total of 247 patients with papillary thyroid carcinoma who underwent surgery in our hospital from December 2019 to December 2021 were selected as the research objects. The expression of BRAF V600E, p53, CD56, CK19, Galectin-3 and TPO were collected and compared to draw a conclusion. Results: In 247 cases of PTC, the posi-tive rates of BRAF V600E, p53, CD56, CK19, Galectin-3 and TPO were 95.95%, 47.37%, 22.27%, 98.38%, 99.19% and 28.74% respectively. Conclusion: The detection of BRAF V600E, p53, CD56, CK19, Galectin-3 and TPO is of great significance in the diagnosis of papillary thyroid carcinoma.

1. 引言

甲状腺癌(thyroid carcinoma)是内分泌系统中常见的恶性肿瘤 [1] ，近年来平均发病率与新发病例数不断增加 [2] [3] 。甲状腺癌又分为PTC、甲状腺滤泡状癌(follicular thyroid carcinoma)、甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma)、未分化癌(undifferentiated carcinoma)，而PTC是临床中甲状腺癌最常见的类型 [4] 。细针穿刺活检(fine-needle aspiration biopsy, FNAB)是临床上公认的区分良恶性甲状腺结节敏感度和特异度最高的方法，但仍有20%~30%的结节通过FNAB无区分良恶性，其恶性风险在10%~75%之间 [5] 。近年来，随着免疫组化检测技术的进步，甲状腺癌的诊断水平得到了显著的进展。BRAF V600E突变是PTC中最常见的基因突变 [6] 。P53是一种抑癌基因，有研究表明甲状腺恶性结节患者P53的突变率明显高于甲状腺良性结节患者 [7] 。此外，多项研究针对CD56、CK19、Galectin-3、TPO均达成共识，其均可用于PTC的诊断 [8] [9] [10] 。故本研究选取BRAF V600E、p53、CD56、CK19、Galectin-3、TPO来分析其在PTC中的表达与诊断价值。

2. 资料与方法

2.1. 一般资料

选取2019年12月至2021年12月在我院行手术治疗的PTC患者为研究对象。纳入标准：① 均在我院行手术治疗且术后病理确诊为PTC；② 入院前尚未接受任何相关抗肿瘤治疗；③ 病史资料齐全者。排除标准：① 有颈部放射史者；② 合并心、肾、肝功能严重损伤或其他恶性肿瘤；③ 交流沟通能力障碍或伴有精神疾病者。本研究共纳入PTC患者共247例，其中男性64例，女性183例，年龄13~71岁，平均年龄41.3岁。

2.2. 检测方法及试剂

① 选取HE切片，连续切4 μm成片，封存在EP管中，二甲苯处理，蛋白酶K完全消化，按照DNA提取试剂盒说明书提取石蜡组织标本DNA，应用BRAF基因突变检测试剂盒进行测序，通过电脑软件分析测序结果。② 采用免疫组化SP (streptavidin-perosidase)法检测p53、CD56、CK19、Galectin-3及TPO的表达情况，标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片(3 μm)及常规的HE染色，采用相关抗体进行染色，严格依照说明书操作。p53、CD56、CK19、Galectin-3和TPO抗体均为鼠抗人抗体，购自福州迈新生物技术开发有限公司。

2.3. 结果判定

BRAF基因由电脑软件分析测序结果。肿瘤细胞P53阳性为突变型，阴性或弱阳性为野生型。CD56以细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性，CK19和TPO染色以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，Galectin-3以细胞浆或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性，均以阳性细胞数 > 10%为阳性。

2.4. 统计方法

所有数据整理后采用SPSS22.0统计软件进行分析，计数资料采用卡方检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

3. 结果

3.1. PTC病理表现

① 癌组织大部分呈乳头状结构，乳头细长分支常在III级以上；② 癌细胞核玻璃样变常见；③ 钙化灶、砂粒体常见；④ 间质硬化、浸润性生长。

3.2. 免疫组化结果

PTC共247例，BRAF V600E为95.95%阳性(237/247)，p53异常突变型为47.37% (117/247)，CD56为22.27%阳性(55/247)，CK19为98.38%阳性(243/247)，Galectin-3为99.19%阳性(245/247)，TPO为28.74%阳性(71/247)。

3.3. P53突变与淋巴结转移

p53异常突变型为117例，其中有淋巴结转移为75例，无淋巴结转移为42例，130例野生型中有淋巴结转移共61例，无淋巴结转移共69例，其差异有统计学意义(P < 0.05)。见表1。

Table 1. Relationship between P53 and lymph node metastasis

表1. P53与淋巴结转移的关系

4. 讨论

BRAF是一种丝氨酸/色氨酸激酶，参与细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路，其编码基因位于染色体7q24，当BRAF基因第1799位碱基由T变成A，则缬氨酸将会取代本来编码的谷氨酸，引起BRAF激酶的持续性激活和MAPK通路的活化，使甲状腺细胞不断增殖而产生肿瘤 [11] [12] 。PTC存在许多基因突变，BRAF V600E突变约占60%~80% [13] 。而我国BRAF V600E突变率可高达80%以上 [14] ，这与本研究中BRAF V600E阳性率为95.95%相一致。

肿瘤蛋白P53基因定位于17号染色体短臂，研究表明此基因突变与至少50%的恶性肿瘤有关，常提示甲状腺癌预后不良 [15] 。本研究中，p53异常突变型为117例，其中淋巴结转移共75例，而130例野生型中淋巴结转移共61例，差异有统计学意义(P < 0.05)，提示p53异常突变型与甲状腺恶性肿瘤的淋巴结相关。无独有偶，PERDAS E等人发现，在甲状腺癌患者中，伴淋巴结转移的患者P53突变型比率明显高于不伴淋巴结转移的患者 [7] 。

CD56是一种细胞表面唾液酸糖蛋白，在本研究中，CD56只有22.27%阳性，与Ceyran A. B等人的研究结果CD56在PTC中无表达或呈灶性弱表达 [16] 相一致。CK19是一种角蛋白，在PTC中主要显示弥漫性强阳性，在其他的甲状腺乳头状增生中一般无表达，即使表达绝大多数呈弱阳性 [17] 。在本研究的247例PTC中，CK19阳性率为98.38%，243例表达阳性，仅仅只有4例表达阴性，由此可以看出CK19在甲状腺乳头状增生与PTC的鉴别中发挥重要作用。Galectin-3是半乳糖结合蛋白，其与特异性配体结合，可以调控甲状腺细胞的增殖、浸润、转移、凋亡，经过多项研究，都表明Galectin-3在甲状腺癌中的阳性率显著高于甲状腺良性病变 [18] [19] ，此结论与本研究一致。而TPO在甲状腺滤泡细胞(Thyroid Follicular Cell)中合成，是甲状腺激素(Thyroid Hormone)合成的关键酶，在甲状腺癌中呈低表达或无表达 [20] ，本研究中TPO阳性率仅为28.74%，说明当TPO为阴性时提示甲状腺恶性肿瘤可能。

因此，BRAF V600E、p53、CD56、CK19、Galectin-3、TPO对PTC的诊断有重要价值，当FNA无法确定甲状腺结节的良恶性时，联合应用免疫组化对PTC的诊断有一定意义。

NOTES

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^*通讯作者E-mail: [e-mail]