1. 引言
石榴皮是石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥果皮。秋季果实成熟后收集果皮晒干而得。石榴皮具有涩肠止泻、抗病毒、抗氧化、抑菌、驱虫等功能 [1] 。临床上石榴果皮煎剂可治疗痢疾和腹泻,浸剂可治疗结肠炎和胃痛等。石榴皮是《中国药典》收载的品种 [2] 。石榴皮中含有黄酮类、鞣质类、有机酸类,多酚类等多种化合物 [3] [4] ,没食子酸是其主要有效成分 [5] 。本文采用紫外分光光度法测定了不同品种石榴皮中没食子酸含量。
2. 材料与方法
1) 石榴样品购自云南省蒙自市当地农贸市场。
2) 仪器和试剂
仪器为紫外-可见分光光度计(TU1810,北京普析),超声提取器(SK3200H,上海仪器制造厂),电热鼓风干燥器(101-1AB型,天津市泰斯特仪器有限公司);没食子酸对照品(ID:3UF2-XRLZ,中国食品药品检验研究院),其他试剂为分析纯。
3) 供试品制备:将新鲜石榴的皮剥下,洗干净后剪小,置于电热鼓风干燥箱中70度加热干燥12小时,粉碎后过100目筛,备用。
4) 对照品溶液制备及最大吸收波长选择:精确称量7.7 mg的没食子酸对照品于100 mL的容量瓶中,用无水乙醇溶解后定容,得到浓度为0.77 mg/mL的对照品溶液。适当稀释后于200~400 nm波长进行扫描,得到最大吸收波长为273 nm。
3. 结果与分析
3.1. 提取条件研究
3.1.1. 乙醇体积分数对提取率的影响
精密称取石榴皮粉末三份各1 g,精密称定后放入100 mL容量瓶中,将提取的料液比(g/mL)固定为1:20,超声时间固定为30 min,设定不同的溶剂:40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇,加入85 mL提取溶剂,提取完成后分别用不同溶剂定容,精密量取4 mL,用溶剂定容到50 ml,再精密量取5 mL,用溶剂定容到25 ml,于273 ml波长出测定吸收度,分别为0.503,0.664,0.441,结果见图1。
3.1.2. 料液比对提取率的影响
固定60%乙醇浓度、提取时间30 min,考察料液比为:1:15,1:20,1:25对提取率的影响,提取及处理过程同2.1.1,测定的吸收度分别为0.482,0.635,0.605,结果见图2。
3.1.3. 超声时间对提取率的影响
固定提取溶剂为60%的乙醇溶液,料液比为1:20,通过改变超声的提取时间来考察时间对提取率的影响,时间定为:30 min、40 min、50 min,提取及处理过程同2.1.1,测定的吸收度分别为0.436,0.540,0.387,结果见图3。
3.2. 方法学讨论
3.2.1. 线性关系考察
取1.4配制的0.77 mg/mL的对照品溶液,精密量取10.0 ml,于50 mL容量瓶中用无水乙醇定容, 得到15.4 μg/mL的标准液。分别精密吸取1.5、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL于10 mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,在273 nm波长处测定吸收度(A),以浓度(μg/mL)为横坐标(X),吸收度为纵坐标(Y),得
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Figure 1. The influence of ethanol volume fraction on the extraction yield
图1. 乙醇体积分数对提取率的影响
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Figure 2. The effect of feed liquid ratio on extraction rate
图2. 料液比对提取率的影响
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Figure 3. The effect of ultrasonic time on extraction rate
图3. 超声时间对提取率的影响
到线性回归方程:Y = 0.0503X + 0.0227,r = 0.9902,n = 6,表明没食子酸在2.31~15.40 μg/mL浓度范围内有良好的线性关系。
3.2.2. 精密度试验
取同一对照品溶液,适当稀释后,于273 nm波长处测定吸收度,平行测定5份,由测得的吸收度计算RSD为1.73%,表明测定的精密度良好。
3.2.3. 重复性试验
取同一批样品5份,精密称定,用60%的乙醇,按1:20的料液比超声提取30 min,过滤取滤液适当稀释后在273 nm波长处分别测定吸收度,由测得的吸收度计算RSD = 3.56%,说明重复性良好。
3.2.4. 稳定性试验
取2.2.3得到的同一个供试品溶液,室温放置,分别于0 h,1 h,2 h,3 h,4 h,5 h,进样测定吸收度值,计算得到其RSD = 2.65%。说明样品在5 h内稳定性良好。
3.2.5. 加标回收率试验
精密称取已经测定含量的同一个供试品3份,分别加入一定量的没食子酸对照品溶液,按供试品制备和测定方法操作。计算其平均加标回收率为94.2%,RSD为3.40%。
3.3. 样品测定
取不同品种的石榴皮样品各约100 mg,精密称定,用60%的乙醇85 mL,按1:20的料液比超声提取30 min后定容,过滤后精密量取滤液4 mL用60%乙醇定容到25 mL,在273 nm波长处分别测定吸收度.其含量测定结果为(干重):甜绿籽6.04%;甜光颜5,91;酸绿子7.35%;酸沙子10.08%.
4. 讨论
1) 本文比较了超声提取和热回流提取,其提取率差别很小,而超声提取简便快速,所以选择用超声提取处理样品。其他提取方法还有水提醇提 [6] [7] 等等。
2) 本文所测定四个品种的石榴皮中没食子酸含量,酸的品种比甜的品种含量高,该方法简便,快速,测定的准确度,精密度和线性关系都令人满意,可以用于石榴中没食子酸的测定。文献报道的石榴皮中没食子酸含量差别很大 [7] [8] [9] ,可能与石榴的品种有关,也可能和测定方法有一定关系,一般UV测定的比HPLC测定的含量要高。
基金项目
云南省教育厅科学研究基金项目资助(2016ZDX225),云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项资金项目【2017FE468(-186)】。
参考文献
NOTES
*通讯作者。