摘要: 目的:为了获得与银杏端粒结合序列相结合的端粒结合蛋白,为木本植物端粒结合蛋白的研究提供实验依据,从而丰富对银杏端粒的研究。方法:以银杏叶片为实验材料,利用酵母单杂交文库筛选获得可能为银杏端粒结合蛋白的基因片段,并通过GFP酵母单杂交实验验证获得基因片段与端粒序列的结合特异性。结果:使用端粒特异性结合序列(TTTAGGG)
3的诱饵载体没有获得合适大小的扩增片段,而使用端粒特异性结合序列(TTTAGGG)
5的诱饵载体成功获得52个扩增片段,这说明端粒DNA序列(TTTAGGG)
3过短,不利用蛋白质的结合。比较这些扩增片段序列并去除相同序列,结果显示这52个扩增片段分别属于10个基因片段。对这10个基因片段进行进一步序列分析,并使用酵母单杂交技术验证,结果显示其中一个基因能够与银杏端粒序列特异性结合。结论:本研究通过酵母单杂交文库筛选,GFP酵母单杂交验证等实验方法建立了银杏端粒结合蛋白的筛选方法,并成功获得了一个和银杏端粒重复序列特异性结合的端粒结合蛋白。